高效液相色谱仪是什么_什么是高效液相色谱仪

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什么是高效液相色谱仪

按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为5类，分别是：

1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。

2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。

3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。

离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。

4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；

小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。

5、亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。例如利用酶与基质（或抑制剂）、抗原与抗体，激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用；

使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物，用来作为层析用固定相，将另一方从复杂的混合物中选择可逆地截获，达到纯化的目的。可用于分离活体高分子物质、过滤性病毒及细胞。或用于对特异的相互作用进行研究。

其应用：

色谱法的应用可以根据目的分为制备性色谱和分析性色谱两大类。

制备性色谱的目的是分离混合物，获得一定数量的纯净组分，这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。

相对于色谱法出现之前的纯化分离技术如重结晶，色谱法能够在一步操作之内完成对混合物的分离，但是色谱法分离纯化的产量有限，只适合于实验室应用。

分析性色谱的目的是定量或者定性测定混合物中各组分的性质和含量。定性的分析性色谱有薄层色谱、纸色谱等，定量的分析性色谱有气相色谱、高效液相色谱等。色谱法应用于分析领域使得分离和测定的过程合二为一，降低了混合物分析的难度缩短了分析的周期，是比较主流的分析方法。

在中华人民共和国药典中，共有超过约600种化学合成药和超过约400种中药的质量控制应用了高效液相色谱的方法。

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液相色谱仪使用及工作原理

工作原理：

流动相通过输液泵流经进样阀，与样品溶液混合，流经色谱柱，在色谱柱中进行吸附、分离，最后每一组分分别经过检测器转变为电讯号，在色谱工作站上出现相应的样品峰。

液相色谱的使用：

首先对样品进行预处理，然后进样，进样完毕后，清洗进样口，每次分析结束后，清洗通道，最后关闭仪器。

扩展资料：

液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致，但由于在气相色谱中以液体代替气相色谱中气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同。

此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定的差别。

主要有以下几力‘面：

①操作条件及应用范围不同

对于气相色谱，是加温操作。仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质，对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难，致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的机物能用气相色谱分析。

而液相色谱是常温操作，不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合相对分子量较大，难汽化，不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析，大约占有机物的70%~80%。

②液相色谱能完成难度较高的分离工作

a.气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，基本不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子主要与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选择不同比例的两种或两种以上的液体做流动相，增加分离的选择性。

b.液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时，选择余地大；而气相色谱并不可能。

c.液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。

③由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，由色谱柱外区域引起的扩张可以忽略不计。

④液相色谱中，制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备，但液相色谱尚缺乏通用的检测器，一起比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种技术是相互补充的。

综上所述，液相色谱具有柱效高，选择性高，灵敏性高，分析速度快，重复性好，应用范围广等优点，该法已成为现代分析技术的主要手段之一。目前在化学，化工，医药，生化，环保，农业等科学领域获得广泛的应用。

高效液相色谱应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

(1)分离混合物

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

通过与试样预处理技术相配合，高效液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度，可分离并同时测定性质上十分相近的物质，能够分离复杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的发展，还可在充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分离。

(2)生化分析

由于高效液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域，并已成为解决生化分析问题最有前途的方法。

(3)仪器联用

高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。高效液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等：高效液相色谱一红外光谱联用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类等．使环境污染分析得到新的发展

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气相色谱仪和液相色谱仪的功能主要有什么区别

一、分析对象差别：

1、气相色谱仪的分析对象：

(1)能气化、热稳定性好和沸点较低的样品。

(2)高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物样品不能检测。

(3)仅占有机物的15%～20%左右。

2、高效液相色谱仪的分析对象：

(1)溶解后能制成溶液的样品。

(2)不受样品挥发性和热稳定性的限制。

(3)分子量大、难气化、热稳定性差、高分子和离子型样品均可检测。

(4)应用广泛，占有机物的80%～85%左右。

二、流动相差别：

1.气相色谱仪的流动相：

(1)流动相为惰性气体。

(2)组分与流动相之间无亲合作用力，只与固定相作用。

2.高效液相色谱仪的流动相：

(1)流动相为液体。

(2)流动相与组分之间有亲合作用力，为提高柱的选择性和改善分离度增加了因素，对分离起很大作用。

(3)流动相种类较多，选择余地大。

(4)流动相极性和PH值的选择对分离起到重要作用。

(5)选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性。

三、工作条件差别：

1、气相色谱仪的工作条件：加温工作。

2、高效液相色谱仪的工作条件：室温，高压(液体粘度大)。

扩展资料：

气相色谱仪特点

（1）大屏幕液晶中文显示，同时显示各路控温参数及载气流量或检测器参数，各种数据一目了然。

（2）数字流量显示，采用电子质量流量计，从屏幕精确显示载气流量。

（3）TCD断气自动保护，仪器断气或漏气时，微机系统自动断开桥电流，保护钨丝不被损坏。

（4）先进的气路流程，仪器采用一次进样，三检测器技术，分离效果更好，灵敏度更高。

（5）自动功能：开机后，仪器自动检测运行状态，如有问题自动显示故障部位及故障类型，并对仪器自我保护。

（6）专用色谱工作站和色谱数据处理器

（7）色谱柱（进口担体）和三个净化器

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液相色谱仪的工作原理

高效液相色谱仪工作原理；高压泵将贮液罐的流动相经进样器送入色谱柱中，然后从检测器的出口流出，这时整个系统就被流动相充满。当欲分离样品从进样器进入时，流经进样器的流动相将其带入色谱柱中进行分离，分离后不同组分依先后顺序进入检测器，记录仪将进入检测器的信号记录下来，得到液相色谱图。

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送，色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万），同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

扩展资料

高效液相色谱仪配置高压二元泵或者低压四元泵，而泵的冲程体积以及混合器的体积大小，均会对色谱基线噪音水平产生影响，特别是在梯度洗脱的时候。一般地泵的冲程体积越小以及混合器的体积相对越大，由输液造成的脉冲相对越小，对于梯度变化的响应能力越高，基线越平缓，

在应用二元泵的时，需要注意的是，当二元混合中的其中一元流动相的比例小于5%的时候，特别是在使用正相等度洗脱对一些医药中间体及终产品进行手性拆分的时候，最好使用单泵预混合的方式。避免由于泵在低比例时泵液精度相对较差，而导致色谱基线出现冲程相关峰，

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液相色谱仪主要测什么 液相色谱仪的用途

1、液相色谱仪对高沸点、难气化合物的混合物通过色谱柱核淋洗剂并以实现分离。
2、液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。
3、使用范围:应用于生物医学、环境化学、石油化工等部门。

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液相和气相色谱仪的原理和组成部件是什么

液相色谱仪：
色谱分离基本原理：在色谱法中存在两相,一相是固定不动的,我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相,我们把它叫做流动相.色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的.使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面.当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用.由于混合物中各组分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡,使得各组分被固定相保留的时间不同,从而按一定次序由固定相中先后流出.与适当的柱后检测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检测.
高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分.
高压输液泵
功能驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；性能要求流量稳定（±1）,耐高压（30～60Mpa）,耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；种类往复泵和隔膜泵.
色谱柱
功能分离样品中的各个物质；尺寸10～30cm长,5mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；填料粒度510μm,高效微粒固定相；
进样器
功能将待分析样品引入色谱系统；种类①注射器,10Mpa以下,10μm微量注射器进样②停流进样③阀进样,常用、较理想、体积可变,可固定④自动进样器,有利于重复操作,实现自动化
检测器
功能将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号；分类①示差折光化学检测器②紫外吸收检测器③紫外一可同分光光度检测器④二极管阵列紫外检测器⑤荧光检测器⑥电化学检测器
馏分收集器
功能如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析,而是为了做其它波谱鉴定,或获取少量试验样品的小型制备,馏分收集是必要的；方法①手工,少数几个馏分,手续麻烦,易出差错.②馏分收集器收集,比较理想,微机控制操作准确.
数据获取和处理系统
功能把检测器检测到的信号显示出来
气相色谱仪：
GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离,其过程如图气相分析流程图所示.待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气,也叫流动相）带入色谱柱,柱内含有液体或固体流动相,由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同,每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡.但由于载气是流动的,这种平衡实际上很难建立起来.也正是由于载气的流动,使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附,结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱,而在固定相中分配浓度大的组分后流出.当组分流出色谱柱后,立即进入检测器.检测器能够将样品组分的与否转变为电信号,而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比.当将这些信号放大并记录下来时,就是气相色谱图了.
（1）
载气系统气相色谱仪中的气路是一个载气连续运行的密闭管路系统.整个载气系统要求载气纯净、密闭性好、流速稳定及流速测量准确.（2）进样系统进样就是把气体或液体样品速而定量地加到色谱柱上端.（3）分离系统分离系统的核心是色谱柱,它的作用是将多组分样品分离为单个组分.色谱柱分为填充柱和毛细管柱两类.（4）检测系统检测器的作用是把被色谱柱分离的样品组分根据其特性和含量转化成电信号,经放大后,由记录仪记录成色谱图.（5）信号记录或微机数据处理系统近年来气相色谱仪主要采用色谱数据处理机.色谱数据处理机可打印记录色谱图,并能在同一张记录纸上打印出处理后的结果,如保留时间、被测组分质量分数等.（6）温度控制系统用于控制和测量色谱柱、检测器、气化室温度,是气相色谱仪的重要组成部分.

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液相色谱仪的使用步骤是什么

目的：制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。
范围：适用于Agilent1260HPLC。
责任：色谱检验工程师负责本规程执行。
内容：
1开机
1.1打开电脑。
1.2打开液相色谱各个模块的电源。
1.3双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。
1.4排气：
1.4.1手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。
1.4.2右键单击“泵”图标区域，选择“方法?”选项，进入泵画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。
1.4.3右键单击“泵”图标，点击“控制?”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
1.4.4右键单击“泵”图标，点击“方法?”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。
1.4.5右键单击“泵”图标，点击“方法?”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。
1.4.6同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法?”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制”选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2方法
2.1点击“方法”－“完整方法”开始完整方法。
2.2选中除“数据分析”外的三项，进入下一选项卡。
2.3方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：Thisisfortest!）。进入下一选项卡。
2.4泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1.0ml/min，停止时间：如10min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。进入下一选项卡。
2.5自动进样器参数设定:选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。
2.6柱温箱参数设定:在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。进入下一选项卡。
2.7UV检测器参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。
2.8在“运行时选项表”中，选中“数据采集”，点击“确定”。
2.9从“方法”菜单，选中“方法另存为?”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。
3单次采集
3.1从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择“前缀/计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。
3.2基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。
4多次数据采集
4.1按照步骤2完整方法。
4.2点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法”
4.3点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择“前缀/计数器”保存。
4.4从“序列”菜单，选中“序列另存为?”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。
4.5从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。
5数据分析（脱机状态使用）
5.1双击“仪器—脱机”图标进入的脱机画面。
5.2从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。
5.3从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。）
5.4做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定”。
6积分:
6.1从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击，自动加载积分参数。
6.2点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。
6.3如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
7标准曲线
7.1点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。
7.2点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。
7.3至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。
8打印报告
8.1从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“确定”。
8.2从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印”钮。
8.3点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法）
9关机
9.1关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）
9.2退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。
9.3关闭Agilent1260各模块电源开关。
10其它注意事项
10.1当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。
10.2系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。
10.3注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。

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液相色谱仪的原理是什么用来干什么

液相色谱仪系统是由由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

液相色谱仪的原理：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据就可以以图谱形式打印出来，以便研究人员分析。

液相色谱仪的用途：

1. 在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。

2. 用于氨基酸、蛋白质的分析，也适合于某些无机离子(NO3-、SO42-、Cl-等无机阴离子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等无机阳离子)的分离和分析，具有十分重要的作用。

3. 适用于水溶液的体系，又适用于有机溶剂的体系。当所用的洗脱剂为水溶液时，称为凝胶过滤色谱，其在生物界的应用比较多。

拓展回答：

液相色谱仪的应用：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。

随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

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一台液相色谱仪大概多少钱

一台液相色谱仪大概一万元左右。

液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC）及液-固色谱(LSC）。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。

应用：

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合，HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度。

使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。

由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

以上内容参考百度百科—液相色谱仪

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